Bst DNA 聚合酶(普通型)

Bst DNA 聚合酶(普通型)
产品描述

rBst DNA聚合酶是嗜热菌属(thermophilic bacterium)嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus,Bst)DNA poll基因的表达产物。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无 3‘→ 5’ 核酸外切酶活性。
 
名称 Cat# 大小 浓度 价格 数量
Bst DNA 聚合酶(普通型)
BPR-200
8,000 units
8 U/μl
1,875.00
Bst DNA 聚合酶(普通型)
BPR-205
20,000 units
16 U/μl
3,140.00
Bst DNA 聚合酶(普通型)
BPR-OEM
Any Size
询价
10x PCR Buffer ll
B-PB10
50 ml
310.00

制品说明:
rBst DNA聚合酶是嗜热菌属(thermophilic bacterium)嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus,Bst)DNA poll基因的表达产物。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无 3‘→ 5’ 核酸外切酶活性。该酶的最佳活性温度是65℃,可用于其他非嗜热DNA聚合酶无法完成的富含GC碱基或 二级结构的DNA的测序。rBst DNA聚合酶适用于多种难 获得的片段的扩增。

用途:
·通过以下方法完成恒温DNA扩增
-环介导恒温扩增(LAMP)
-全基因组扩增(WGA)
-支链扩增(RAM)
·随机引物DNA标记
·dsDNA 5’突出端补平法标记。

酶贮存液:
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1.0 mM DTT
0.1 mM EDTA
0.1% Triton X-100
50% 甘油
pH 7.5,25°C保存

随酶提供:
10X PCR Buffer II

10X PCR Buffer II
200 mM Tris-HCl
100 mM (NH4)2SO4
100 mM KCl
20 mM MgSO4
1.0% Triton X-100
pH 8.8,25°C保存

单位定义:
1单位酶在65℃,30分钟 可催化10 nmol dNTPs合成掺入酸性不溶物所需酶的量。

核酸污染检测
单链 核酸外切酶活性:
在50μL反应体系中,10μL酶溶液和11,000 cpm放射性标记的单链DNA底物作用,37℃孵育4小时,溶液中可溶性TCA的释放量 小于5.0%。

双链 核酸外切酶活性:
在50μL反应体系中,10μL酶溶液和5,000 cpm放射性标记的双链DNA底物作用,37℃孵育4小时,溶液中可溶性TCA的释放量 小于0.5%。

核酸内切酶活性:
在50μL反应体系中,10μL酶溶液与0.5μg pBR322 DNA作用,37℃孵育4小时,经琼脂糖凝胶电泳,无肉眼可见的环状切口DNA出现。

质量控制分析
单位定义方法:
酶的单位活性是 通过2倍连续稀释法测得的。用1X reaction buffer稀释本酶,加入到含10μg 小牛胸腺DNA,1X PCR Buffer II,4m Ci/mL 3H-dTTP和100μM dNTPs的50μL反应体系中,酶的终浓度0.00075~0.1μg/μL。37℃条件下孵育10分钟,冰浴后进行1%的琼脂糖凝胶电泳,然后按照Sambrook and Russell的方法进行分析(Molecular Cloning, v3, 2001, pp. A8.25-A8.26)。

蛋白浓度测定(OD280):
标准操作下,2.0μL蛋白样品,以2.0mg/ml BSA标准样(Pierce Cat#23209)为阳性对照,产品保存液为空白对照,经Nanodrop ND-1000 分光光度计测定OD280值。3次检测的平均值,根据吸光系数转换为52,770mg/mL,分子量为66,215Da。标准样品的允许误差为±5%。

SDS-PAGE(物理纯度检测)

4-20%的变性Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝胶,取2.0μL浓缩酶上样,两侧分别取分辨分子量范围较大的蛋白Marker和2.0μL 100倍稀释的待测酶上样。凝胶电泳后进行染色,并通过比较样品确定酶的纯度。本次实验的验收标准为,当浓缩样品中的污染物条带的总质量不超过稀释样品中的目的条带的蛋白质的质量时,可判定浓缩样品的浓度大于99%。


E.coli 16s rDNA污染检测:
将5μL酶溶液进行变性,用16s RNA基因位点的寡聚核苷酸引物 , 进行TaqMan qP CR 分析, 检测E.coli基因组DNA污染物的存在。根据无模板对照的Ct值和标准曲线 的 比对结果,本检测的下限可达到10个拷贝/样品。


注意事项:
活性检测过程中,按上述方法加入的小牛胸腺DNA底物的量大约是Beese等推荐的方法用量的3倍。


推荐贮存条件:
-20℃


参考文献:

  1. Kiefer, et al. Structure 15 January 1997. 5, 95-108.

Manual & Protocols



COA ( Certificate of Analysis )



MSDS & Certificates

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One-Step™基于载体的一步法miRNA前体克隆系统
TWEEN 20
SDS高分子量电泳缓冲液
One-Step™基于载体的一步法miRNA前体克隆系统 TWEEN 20 SDS高分子量电泳缓冲液
¥1,765.00
¥1,275.00
¥280.00
 
Protein A,Agarose
204止泡剂
DNA分子量标准
Protein A,Agarose 204止泡剂 DNA分子量标准
¥1,145.00
¥1,880.00
¥3,000.00
 
Protein G
50% CA-630 聚乙二醇苯基醚(IGEPAL)(NP-40)
shRNA表达载体
Protein G 50% CA-630 聚乙二醇苯基醚(IGEPAL)(NP-40) shRNA表达载体
¥100.00
¥1,730.00
¥1,060.00