Poly (A) 聚合酶，酵母

制品说明：
Poly (A)聚合酶（酵母）催化由 ATP转化的AMP添加到RNA 3’端，该反应不依赖模板的存在。该酶（酵母）在RNA的寡聚核苷酸标记和末端加poly (A)功能方面优于E.Coli，所需的孵育时间短，长底物和短底物均可标记。Poly (A)优先标记较长的RNA分子，而T4 RNA连接酶更适合标记较短的RNA分子。该酶需ATP作底物，需Mn2+、Mg2+以及含有3’-羟基的RNA作为引物。较长的RNA分子引物作用优于短的低聚体。用5’端虫草素标记的三磷酸盐代替ATP，可在RNA的3’端引入单个dA残基，这是一种有效的RNA 3’端标记技术。

用途：
·用ATP或虫草素（cordycepin）进行RNA 3’末端标记
·RNA末端加Poly (A)尾，用于克隆或亲和纯化
·用Oligo-dT为cDNA合成提供引物结合位点
·提高转染至真核细胞中的RNA的翻译效率

来源：
重组E. coli菌株，含有克隆自大肠杆菌（Saccharomyces cerevisiae）的 Poly（A）聚合酶基因。

浓度（比活）：
>20,000 U/mg

单位定义：
1单位指37 ℃条件下，1分钟催化1 nmol的AMP掺入酸性不溶物所需要的酶量。

储存Buffer：
20 mM Tris-HCl (pH 8.0)，50 mM KCl，0.5 mM DTT，50%甘油

活性检测条件：
在1X Poly (A)聚合酶反应缓冲液中，加入1 mM ATP和500 ng 5’FAM标记的20-mer RNA。37℃温育10分钟后，经20%聚丙烯酰胺凝胶电泳或自动毛细管DNA测序仪检测Poly(A) 添加物的长度。在本次检测中，5 U酶可添加约60-80个腺苷酸到RNA引物，在这种条件下，20U的酶可以将所有rATP用尽。

热失活：
65℃，20分钟

推荐贮存条件：
-20℃

参考文献：
1.             Sippel, A. E. (1973) Eur. J. Biochem. 37, 31-40.
2.             Edmonds, M. (1982) in The Enzymes, 3rd edition, ed. P. D. Boyer (Academic Press, New York) 15, 217-244.
3.             Gething, M. J., Bye, J., Skehel, J. and Waterfield, M. (1980) Nature 287, 301-306.
4.             Sano, H. and Feix, G. (1976) Eur. J. Biochem. 71, 577-583.