Pfu DNA 连接酶

Description

制品说明:
Pfu DNA连接酶是一种热稳定酶，这有助于在两条相邻DNA链的5′-磷酸和3′-羟基之间形成磷酸二酯键，这两条DNA链完全配对并与互补DNA链对齐，确保没有缺口。这种连接酶需要ATP作为辅因子，并在45°C至70°C的高温范围内表现出活性。

Pfu DNA连接酶在高温培养过程中对连接DNA中的缺口非常有效。其极端的热稳定性使其能够承受PCR过程的严格条件。虽然它不连接限制性内切酶消化中常见的短4个碱基连接，但它擅长有效地连接12个碱基对的连接。此外，这种酶是从重组来源分离出来的，确保了其纯度和精确分子生物学应用的有效性。

应用:
Pfu DNA 连接酶可连接这些底物:

• 使用连接酶检测反应和连接酶链反应检测等位基因特异性基因^(1,2)

• 在PCR扩增过程中引入磷酸化寡核苷酸进行诱变⁽³⁾

来源:

纯化于含有Pfu DNA连接酶基因的重组 E. coli 菌株。

产品组分信息:

单位定义:
一个单位（黏末端单位）是指50µl的总反应体积，在45℃下孵育15分钟，将1µg BstEII 消化的λDNA 的12个碱基对黏末端连接50%所需的酶量。黏末端单位等同于缺口闭合单位（1）。

随酶提供:
10X Pfu DNA Ligase Reaction Buffer

1X Pfu DNA Ligase Reaction Buffer
10 mM Tris-HCl
600 µM ATP
2.5 mM DTT
2.5 mM MgCl₂
0.1% Triton® X-100
(pH 7.5 @ 25°C)

Supplied in:
Storage Buffer:
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 µg/ml 重组白蛋白
50% 甘油
10 mM (NH4)₂SO₄
pH 7.4 @ 25°C

反应条件:
1X Pfu DNA Ligase Reaction Buffer
Incubate at 45°C

使用浓度: 40,000 units/ml

热灭活: 不可以

单位含量测定条件:
50µl反应体系（1X Pfu DNA连接酶反应缓冲液、20µg/ml BstEII），45°C条件下孵育15分钟。终止反应，在反应管中加入终止染料（由50%甘油、50 mM EDTA和溴酚蓝组成），70℃加热10分钟。然后将反应管中所有反应产物在0.7%琼脂糖凝胶上检测。反应产物即使进行了70℃热处理，若还残存有活性的连接酶，BstEII消化的λDNA的cos末端也能保持连接在一起。

储存条件: -20°C

参考文献:

1. Barany, F. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 189-193.
2. Barany, F. (1991) The Ligase Chain Reaction in a PCR World. (pp. 5-16, Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory).
3. Michael, S.F. (1994) Biotechniques 16, 411-412.

该产品仅限于实验科学研究用，若有任何单位或个人将该产品用于临床诊断、治疗等其他国家专门规定的特殊用途，本公司概不承担任何责任。

Additional information

Manual & Protocols

Pfu DNA Ligase _manual_v2.0