Taq DNA 聚合酶

Description

制品说明： 

Taq DNA聚合酶（常规）是一种热稳定的酶，具有高持续性5′->3’聚合酶活性和5′->3”核酸外切酶活性。该酶从大肠杆菌中提纯出来，是一条单肽链，蛋白分子量为94kDa，在有dNTP和引物的情况下从单链模板合成DNA。

应用：

• PCR（普通和高通量）
• 引物延伸
• 微点阵分析
• DHPLC

来源：

携带来自Thermophilic organism，Thermus Aquaticus YT-1的Taq DNA 聚合酶基因的重组E.coli 菌株。

随酶提供：

10x Taq PCR Buffer (no dNTP)

 10x Taq PCR Buffer (no dNTP)：

20 mM Tris-HCl

100 mM NaCl

1.0 mM DTT

0.1 mM EDTA

50% 甘油

pH 7.5 @ 25℃

单位定义：

1单位是指在75℃条件下30分钟内，将10 nmol dNTPs合成掺入酸性不溶物所用的酶量。

PCR指南：

Taq DNA聚合酶是最早，也是最常用的PCR酶。Taq 酶适用于小于5kb，复杂性不高的DNA片段的扩增，不需优化即可保持稳定的产率。在使用Taq DSC 2.0 DNA 聚合酶进行PCR设计时，请遵循以下指导：

1、DNA模板：虽然PCR模板的高度纯化一般来说没有必要，但是当使用未经纯化或简单纯化的PCR模板时，应注意处理液或化学试剂会影响PCR的过程。应避免模板暴露于紫外灯或接触其他可破坏DNA的试剂，如高离子强度溶液，SDS等表面活性剂，负载染料和苯酚等。在制备PCR反应液的过程中，为了避免污染，应当在正压环境中操作，并使用含气溶胶屏障的枪头。通常25个循环的PCR反应，可复制104个目标序列，模板的终浓度约为1-1 ng/mL 质粒DNA，1-10 μg/mL 基因组DNA。使用低浓度的DNA模板，可以降低非特异性PCR产物的量，而高浓度的DNA模板可以减少循环次数，降低突变率。

2、引物设计：理想的引物长度是15-30 bp，G+C碱基含量50%，两条引物的退火温度相差不超过+/-3℃。建议使用软件检测引物自身的互补性和发夹结构，一些引物合成公司也可提供此类服务。必须注意，尽管引物5’端可以含有不匹配碱基，但3’端必须与模板严格配对。反应液中引物的最佳浓度是1-0.5μM。

3、Mg²⁺：尽管不同反应液中Mg²⁺浓度不同，但Mg²⁺是PCR反应液中不可缺少的组分。通常使用5-2.0 μM的Mg²⁺，高浓度的Mg²⁺（最高可达5 mM）可提高PCR的产量，但同时会降低保真率。相反，低浓度的Mg²⁺可提高产物的保真率，但同时会降低扩增产量。需要注意，某些反应组分，尤其是模板DNA和寡核苷酸，可能引入螯合剂，这会降低有效的Mg²⁺含量，造成PCR反应终止。

4、dNTPs: 虽然高浓度的dNTP可提高PCR产量，尤其是长片段PCR扩增，而低浓度的dNTPs可提高产物的保真率，但通常反应液中dNTPs的终浓度为100-200 μM。在某些应用中，Taq DSC 2.0 DNA 聚合酶同样可利用dNTPs类似物脱氧尿苷和肌苷。

5、Taq DSC 2.0 聚合酶：一般浓度为1U/50μL反应液（20U/mL）。为了提高产量，可适量增加taq酶。Taq DSC 2.0 DNA 聚合酶的延伸速度大约是每分钟1-2000核苷酸，因此每1 kb模板延伸1个循环需要30-60秒。延伸温度是68-72℃。由于Taq DSC 2.0 DNA 聚合酶对双链DNA片段有天然的亲和力，可启动自身的热启动功能，因此在延伸反应的起始不需要变性步骤来激活聚合酶。

50μL 反应体系：

以下Mix在冰上配制，两者混匀，置于热循环仪加热至94℃：

2x DNA/Oligonucleotide Master Mix:

1.0µl 10 mM dNTPs

1.0µl 10µM Forward Primer

1.0µl 10µM Reverse Primer

1.0µl 500 ng/µl genomic DNA

21µl Type I Water

2x Enzyme/Buffer Master Mix:

5.0µl 10x Taq PCR Buffer

0.2µl 5 U/µl Taq DSC 2.0 DNA Polymerase

19.8µl Type I Water

储存条件： -20℃

该产品仅限于实验科学研究用，若有任何单位或个人将该产品用于临床诊断、治疗等其他国家专门规定的特殊用途，本公司概不承担任何责任。

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Manual & Protocols