Poly (A) 聚合酶，酵母

Description

制品说明： 

Poly (A)聚合酶（酵母）催化由 ATP转化的AMP添加到RNA 3’端，该反应不依赖模板的存在。该酶（酵母）在RNA的寡聚核苷酸标记和末端加poly (A)功能方面优于Poly (A)聚合酶（E.Coli ），所需的孵育时间短，长底物和短底物均可标记。Poly (A)优先标记较长的RNA分子，而T4 RNA连接酶更适合标记较短的RNA分子。该酶需ATP作底物，需Mn²⁺、Mg²⁺以及含有3’-羟基的RNA作为引物。较长的RNA分子引物作用优于短的低聚体。用5’端虫草素标记的三磷酸盐代替ATP，可在RNA的3’端引入单个dA残基，这是一种有效的RNA 3’端标记技术。

应用：

• ATP或虫草素标记RNA的 3’末端
• 用于克隆或亲和纯化的RNA Poly（A）尾部
• 用Oligo-dT为cDNA合成提供引物结合位点
• 提高转染至真核细胞中的RNA的翻译效率

来源：

含有酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）的 Poly（A）聚合酶基因的重组E. coli 菌株。

比活度：>20,000 U/mg

单位定义：

1单位定义是指37 ℃条件下，1分钟催化1 nmol 的AMP掺入酸性不溶物所需要的酶量。

 随酶提供：

5x Poly(A) Polymerase Reaction Buffer:

100 mM Tris-HCl, pH 7.0, 3.0 mM MnCl₂, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 500 µg/ml Acetylated BSA, 50% 甘油.

酶贮存液：

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 0.5 mM DTT, 50% 甘油

活性检测条件：

在1X Poly (A)聚合酶反应缓冲液、20ul 反应体系中，加入1 mM ATP和500 ng 5’FAM标记的20-mer RNA。37℃温育10分钟后，经20%聚丙烯酰胺凝胶电泳或自动毛细管DNA测序仪检测Poly(A) 添加物的长度。在本次检测中，5 U酶可添加约60-80个腺苷酸到RNA引物，在这种条件下，20U的酶可以将所有rATP用尽。

 热灭活：65℃孵育20分钟

储存条件： -20°C

参考文献：

1. Sippel, A. E. (1973) Eur. J. Biochem. 37, 31-40.
2. Edmonds, M. (1982) in The Enzymes, 3rd edition, ed. P. D. Boyer (Academic Press, New York) 15, 217-244.
3. Gething, M. J., Bye, J., Skehel, J. and Waterfield, M. (1980) Nature 287, 301-306.
4. Sano, H. and Feix, G. (1976) Eur. J. Biochem. 71, 577-583.

该产品仅限于实验科学研究用，若有任何单位或个人将该产品用于临床诊断、治疗等其他国家专门规定的特殊用途，本公司概不承担任何责任。

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